说明书下载细菌基因组DNA纯化试剂盒
离心柱型
目录号：GF2302
产品内容
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产品组成 |
GF2302 / (100 preps) |
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溶液GA (Buffer GA) |
30 ml |
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溶液BG (Buffer BG) |
60 ml |
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蛋白酶K (20mg/ml) |
1.2 ml*2 |
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漂洗液PW (Buffer PW) |
30 ml（使用前请先加入120 ml无水乙醇） |
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洗脱缓冲液TB (Buffer TB) |
30 ml |
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吸附柱CG1 (Spin Columns CG1) |
100个 |
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收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) |
100个 |
选配试剂
RNase A (100 mg/ml 货号：GF0201-01)；溶菌酶A（50mg/ml 货号：GF0203-01）
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
产品简介
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附DNA，可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
提取得率
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材料 |
提取量 |
DNA得率 |
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细菌培养液 |
105—108cells |
5-20μg |
注意事项
1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.若溶液GA或溶液BG中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3.所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 取细菌培养液1-5 ml，10,000rpm (~11,500×g) 离心1 min，尽量吸净上清。
2. 向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。
注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步骤，加入溶菌酶A进行破壁处理，具体方法为：用110 μl复合酶缓冲液LY（客户自备，Genefist，货号：RT401-11）彻底重悬菌体，加入50 μl溶菌酶A（客户自备，50 mg/ml，Genefist，货号：GF0203-01），37℃处理30min以上。如果需要去除RNA，可加入4μl RNA酶A（100mg/ml）溶液（客户自备，Genefist，货号：GF0201-01），振荡15sec，室温放置5 min。
3. 向管中加入20 μl蛋白酶K溶液，混匀。
4. 加入200μl溶液BG，振荡15sec，70℃放置10min,溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意：加入溶液BG时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
5. 加入200μl无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CG1放回收集管中。
7. 向吸附柱CG1中加入300μl溶液BG，12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CG1放入收集管中。
8. 向吸附柱CG1中加入700μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CG1放入收集管中。
9. 重复操作步骤8。
10. 将吸附柱CG1放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CG1置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，以免影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
11. 将吸附柱CG1转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl洗脱缓冲液TB，室温放置2-5min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。
12. 注意：洗脱液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CG1中,室温放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min。
DNA浓度及纯度检测
得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。