说明书下载高纯度质粒小提试剂盒
（离心柱型）
目录号：GF2104
产品内容
|
产品组成 |
GF2104 / (20 preps) |
GF2104 / (100 preps) |
|
溶液P1 (Buffer P1) |
6 ml |
30 ml |
|
溶液P2 (Buffer P2) |
6 ml |
30 ml |
|
溶液P3 (Buffer P3) |
6 ml |
30 ml |
|
漂洗液PW (Buffer PW) |
6 ml（使用前请先加入24 ml无水乙醇） |
30 ml（使用前请先加入120 ml无水乙醇） |
|
洗脱缓冲液TB (Buffer TB) |
15 ml |
30 ml |
|
RNase A (10 mg/ml) |
150 μl |
750 μl |
|
过滤柱CS1 (Filtration Columns CS1) |
20个 |
100个 |
|
吸附柱CP1 (Spin Columns CP1) |
20个 |
100个 |
|
收集管(2 ml) (Collection Tubes 2 ml) |
40个 |
200个 |
储存条件
该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNaseA 加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月。单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。
产品简介
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。本试剂盒提供一种新型核酸提取吸附柱，显著提升了吸附柱对核酸的吸附选择性和洗脱效率，同时增加了过滤柱，与普通提取方法相比，可去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。实验表明，与传统硅胶膜柱相比，本柱在核酸产量、纯度（A260/280、A260/230）和下游实验兼容性上均表现出色，特别适用于复杂样本的快速高纯提取。以下操作步骤适用于提取1-5 ml过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。
提取得率
|
质粒类型 |
菌液量 |
得率 |
质粒 |
|
低拷贝 |
1-5 ml |
3-12 μg |
pBR322, pACYC及其衍生载体，pSC101及其衍生载体，SuperCos, pWE15 |
|
高拷贝 |
1-5 ml |
6-30 μg |
pTZ, pUC, pBS, pGM-T |
注意事项 请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.溶液P1在使用前先加入RNase A （将试剂盒中提供的RNaseA 全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2.使用前请先检查溶液P2、P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3.所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm(~13,400×g)。
4.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.取1-5 ml过夜培养的菌液加入离心管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl溶液P1（请先检查是否已加入RNase A ），使用移液器吸吐或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3.向离心管中加入250 μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
4.向离心管中加入250 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12,000 rpm(~13,400×g)离心10 min，用移液器小心地将上清转移到过滤柱CS1（过滤柱放入收集管），注意尽量不要吸出沉淀。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取清。
5. 12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，小心将离心后收集管中得到的溶液转移到吸附柱CP1中（吸附柱放入收集管中），（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤4吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量的吸取上清）。
6. 12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP1放入收集管中。
7.向吸附柱CP1中加入700 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP1放入收集管中。
8.重复操作步骤7。
9.将吸附柱CP1放入收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP1开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
10.将吸附柱CP1置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min将质粒溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μl，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响，若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。
低拷贝或大质粒（ >10kb）提取
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5-10 ml过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液TB应在65-70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。