说明书下载通用型DNA纯化回收试剂盒
（离心柱型） / 目录号：GF2214
产品内容
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产品组成 |
GF2214 / (20 preps) |
GF2214 / (100 preps) |
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溶液PC (Buffer PC) |
15 ml |
60 ml |
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漂洗液PW (Buffer PW) |
6 ml（使用前先加入24 ml 无水乙醇） |
30 ml（使用前先加入120 ml 无水乙醇） |
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洗脱液TB (Buffer TB) |
15 ml |
30 ml |
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吸附柱CB1 (Spin Columns CB1) |
20个 |
100个 |
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收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) |
20个 |
100个 |
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
产品简介及特性
本试剂盒采用新型核酸提取吸附柱，其核心为经独特表面改性与孔径优化的纳米硅基微孔板，显著提升了核酸吸附选择性与洗脱效率。结合独特的缓冲液体系，既可回收TAE/TBE琼脂糖凝胶中100 bp–20 kb的DNA片段，也可直接纯化PCR产物。全程仅需15分钟，无需苯酚萃取和酒精沉淀，纯化产物无盐类或大分子污染，可直接用于酶切、PCR、测序、连接与转化等实验。
产品特点：
Ø 使用相同的溶液，可进行三种不同的应用（PCR产物纯化、DNA产物纯化、胶体回收）。
Ø 每一离心管柱可处理达150ul的DNA溶液或PCR反应产物，DNA回收率可达80%-95%。
Ø 可用于以TAE或TBE缓冲液配制的琼脂糖凝胶的DNA回收，DNA回收率可达60%-90%。
注意事项
1.电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，加20-50 μl洗脱液；如回收前有5-15 μg左右DNA，加30-100 μl洗脱缓冲液；如回收前有15-30 μg左右DNA，加50-300 μl洗脱缓冲液。
5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
6.对于 <100 bp和 >10 kb的DNA片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
一、从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA
1.完成PCR扩增或其他酶切反应操作后，移取反应混合液（含有预纯化的DNA）至干净的离心管。
2.加入2倍体积的溶液PC至反应混合液中（如50μl反应混合液加入100 μl的结合液）,震荡混合均匀。
3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步混合液至吸附柱，室温放置2min，以12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min，丢弃收集管中的悬液，将吸附柱CB1放回收集管中。
注意：若样本体积超过700 μl，可分次加入并重复此步骤。
4.加入700 μl的漂洗液至吸附柱中，静置1 min以平衡管柱膜，于12,000 rpm(~13,400×g)离心1min，丢弃悬液，将吸附柱CB1放回收集管中。
5.重复操作步骤4。
6.将吸附柱CB1放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2min，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等实验
7.将吸附柱CB1置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液TB，室温放置2min。12,000 rpm(~13,400×g)离心2min收集DNA溶液。
注意：洗脱体积不应小于30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20°C，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，12,000rpm(~13,400×g)离心2 min，将DNA溶液收集到离心管。
二、从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
1.完成电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 μl）。
2.向胶块中加入2倍体积的溶液PC，60℃水浴孵育5-15min或更久，其间不断温和地上下翻转离心管，直至胶块充分溶解。（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。
注意：胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。
3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步溶胶液至吸附柱，以12,000 rpm(~13,400×g)离心1min，丢弃收集管中的滤液，将吸附柱CB1放回收集管中。
注意：若样本体积超过700 μl，可分次加入并重复此步骤。
4.向吸附柱加入700 μl的漂洗液，静置1 min以平衡管柱膜，于12,000 rpm(~13,400×g)离心1min，丢弃滤液，将吸附柱CB1放回收集管中。
5.重复操作步骤4。
6.将吸附柱CB1放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2min，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等实验。
7.将吸附柱CB1置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液TB，静置2 min，室温放置2min，12,000 rpm(~13,400×g)离心2min收集DNA溶液。
注意：洗脱体积不应小于30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，12,000rpm(~13,400×g)离心2 min，将DNA溶液收集到离心管。