普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

（离心柱型） / 目录号：GF2209

产品内容

储存条件

该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。若溶液产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。

产品简介及特性

本试剂盒采用新型核酸提取吸附柱，其核心为经独特表面改性与孔径优化的纳米硅基微孔板，显著提升了核酸吸附选择性与洗脱效率。结合独特的缓冲液体系，可回收TAE/TBE琼脂糖凝胶中100 bp–30 kb的DNA片段，回收率可达80%以上。同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，纯化产物可直接用于酶切、PCR、测序、连接与转化等实验。

产品特点：

Ø  整个操作过程快速方便，十几分钟即可完成回收工作。

Ø  可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。

Ø  独特的离心柱和精心配制的缓冲液可大量回收到高纯度的目的DNA。

注意事项

1.电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。

3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

4.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，加20-50 μl洗脱液；如回收前有5-15 μg左右DNA，加30-100 μl洗脱缓冲液；如回收前有15-30 μg左右DNA，加50-300 μl洗脱缓冲液。

5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。

6.对于 <100 bp和 >10 kb的DNA片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。

操作步骤

使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1.完成电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 μl）。

2.向胶块中加入2倍体积的溶液PN，60℃水浴孵育5-15 min或更久，其间不断温和地上下翻转离心管，直至

胶块充分溶解。（若胶块的体积过大，可事先将胶块切成碎块）。

注意：胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在室温时结合DNA的能力较强。

3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步溶胶液至吸附柱，以12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min，丢弃收集管中的滤液，将吸附柱CB2放回收集管中。

注意：若样本体积超过700 μl，可分次加入并重复此步骤。

4.向吸附柱加入700 μl的漂洗液，静置1 min以平衡管柱膜，于12,000 rpm(~13,400×g)离心1 min，丢弃滤液，将吸附柱CB2放回收集管中。

5.重复操作步骤4。

6.将吸附柱CB2放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。

注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等实验。

7.将吸附柱CB2置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱液TB，静置2 min，室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min收集DNA溶液。

注意：洗脱体积不应小于30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用ddH₂O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)离心2 min，将DNA溶液收集到离心管。

DNA浓度及纯度检测

1.       回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2.       DNA应在OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。

3.       OD260 /OD280 比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH₂O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

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