说明书下载普通DNA产物纯化试剂盒
（离心柱型） / 目录号：GF2204
产品内容
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产品组成 |
GF2204 / (20 preps) |
GF2204 / (100 preps) |
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溶液PB (Buffer PB) |
15 ml |
60 ml |
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漂洗液PW (Buffer PW) |
6 ml（使用前先加入24 ml 无水乙醇） |
30 ml（使用前先加入120 ml 无水乙醇） |
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洗脱液TB (Buffer TB) |
15 ml |
30 ml |
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吸附柱CB2 (Spin Columns CB2) |
20个 |
100个 |
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收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) |
20个 |
100个 |
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。若溶液产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀。
产品简介及特性
本试剂盒采用新型核酸提取吸附柱，其核心为经独特表面改性与孔径优化的纳米硅基微孔板，显著提升了核酸吸附选择性与洗脱效率。结合独特的缓冲液体系，可纯化酶切、PCR等反应溶液中的DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质，纯化产物可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接与转化等实验。
产品特点：
Ø 整个操作过程快速方便，十几分钟即可完成回收工作。
Ø 可以回收单链、双链DNA片段以及环状质粒DNA。
Ø 独特的离心柱和精心配制的缓冲液可大量回收到高纯度的目的DNA。
注意事项
1.本试剂盒适用于无选择性的回收溶液中所有DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择胶回收试剂盒。
2.洗脱缓冲液加量应根据回收前DNA量来决定：如回收前DNA只有1-5 μg左右，加20-50 μl洗脱液；如回收前有5-15 μg左右DNA，加30-100 μl洗脱缓冲液；如回收前有15-30 μg左右DNA，加50-300 μl洗脱缓冲液。
3.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越少，回收率越低。
4.对于 <100 bp和 >10 kb的DNA片段可以适当的增加吸附和洗脱的时间。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1.完成PCR扩增或其他酶切反应操作后，移取反应混合液（含有预纯化的DNA）至干净的离心管。
2.加入2倍体积的溶液PB至反应混合液中（如50μl反应混合液加入100 μl的结合液）,震荡混合均匀。
3.将吸附柱放入收集管中，移取上一步混合液至吸附柱，室温放置2min，以12,000rpm(~13,400×g)离心1min，丢弃收集管中的悬液，将吸附柱CB2放回收集管中。
注意：若样本体积超过700 μl，可分次加入并重复此步骤。
4.加入700μl的漂洗液至吸附柱中，静置1 min以平衡管柱膜，于12,000 rpm(~13,400×g)离心1min，丢弃悬液，将吸附柱CB2放回收集管中。
5.重复操作步骤4。
6.将吸附柱CB2放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)离心2 min，将吸附柱开盖置于室温放置数分钟，以去除、晾干残余的漂洗液。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶切、PCR等实验
7.将吸附柱CB2置于一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液TB，室温放置2min。12,000 rpm(~13,400×g)离心2min收集DNA溶液。
注意：洗脱体积不应小于30 μl，体积过少影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响，若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20°C，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，12,000rpm(~13,400×g)离心2 min，将DNA溶液收集到离心管。
DNA浓度及纯度检测
1. 回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
2. DNA应在OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为1相当于大约50μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。
3. OD260/OD280 比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。