说明书下载血液/细胞/组织基因组DNA纯化试剂盒
离心柱型
目录号：GF2304
产品内容
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产品组成 |
GF2304 / (100 preps) |
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溶液GA (Buffer GA) |
30 ml |
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溶液BG (Buffer BG) |
60 ml |
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蛋白酶K (20mg/ml) |
1.2 ml*2 |
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漂洗液PW (Buffer PW) |
30 ml（使用前请先加入120 ml无水乙醇） |
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洗脱缓冲液TB (Buffer TB) |
30 ml |
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吸附柱CG1 (Spin Columns CG1) |
100个 |
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收集管(2 ml) (Collection Tubes 2ml) |
100个 |
选配试剂
红细胞裂解液（Red Cell Lysis Buffer货号：GF1201-01）；RNaseA (10 mg/ml货号：GF0201-01)
储存条件
该试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。
产品简介
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱，和独特的缓冲液系统，能高效、专一吸附DNA，可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,用来提取多种细胞中的基因组DNA。不需要苯酚、氯仿等有机溶剂，安全方便；提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。根据不同的样本量和样本类型，可以提取的DNA产量范围为1-40ug。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
提取得率
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材料 |
提取量 |
DNA得率 |
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哺乳动物全血 |
100-400ul |
3-10ug |
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禽类、两栖类全血 |
5-20ul |
5-40ug |
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动物细胞培养液 |
106-107 cells |
5-30ug |
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动物组织 |
30mg |
10-30ug |
注意事项
1.样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
2.若溶液GA或溶液BG中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，摇匀后使用。
3.所有离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。
操作步骤
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1.处理材料
a.如样本为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加溶液GA补足；
注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，应按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如，300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。10000rpm(~11,500×g)离心1min（若离心机最高转速不允许，可3000rpm(~3,400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul溶液GA，振荡至彻底混匀。
b.如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量5-20ul，可加溶液GA补足200后进行下面的裂解步骤。
c.贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10,000rpm(~11,200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul溶液GA，振荡至彻底悬浮。
d.动物组织（脾组织用量应少10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10,000rpm(~11,200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮。
注意：如果需要去除RNA，可加入40ul RNase A（10 mg/ml）溶液（客户自备，目录号：GF0201-01），
振荡15sec，室温放置5min。
2.加入20ulProteinase K溶液，混匀。
a.提取血液基因组时，加入ProteinaseK，混匀，即可继续进行下一步。
b.提取细胞基因组时，加入ProteinaseK，混匀，即可继续进行下一步。
c.提取组织基因组时，加入ProteinaseK混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内
壁的水珠，再进行下一步骤。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需1-3h即可完成（鼠尾需要消化过夜），每小时颠倒混合样品2-3次，用水浴振荡器也可。
3.加入200ul溶液BG，充分颠倒混匀，70℃放置10min,溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
注意：加入溶液BG时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。当血液体积 ≤200ul且没有采用红细胞裂解处理，或是样本储存条件不佳，水浴后颜色可能为深褐色，注意溶液中没有团块等沉淀。
4.加入200ul无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CG1中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CG1放回收集管中。
6.向吸附柱CG1中加入300ul溶液BG，12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CG1放入收集管中。
7.向吸附柱CG1中加入700ul漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm(~13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CG1放入收集管中。
8.重复操作步骤7。
9.将吸附柱CG1放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CG1置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，以免影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10.将吸附柱CG1转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200ul洗脱缓冲液TB，室温放置2-5min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱液体积不应少于50ul，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CG1中,室温放置2min，12,000rpm(~13,400×g)离心2min。